Экспериментальное обоснование эффективности глицина при инфаркте миокарда

Аннотация

Целью исследования была оценка влияния аминокислоты глицина на степень повреждения кардиомиоцитов при инфаркте миокарда, которая оценивалась по активности кардиоспецифичных ферментов в крови. Эксперименты были проведены на кроликах-самцах, у которых экспериментальный инфаркт миокарда вызывали путем перевязки нисходящей ветви левой коронарной артерии. Сразу после перевязки опытным кроликам перорально вводили водный раствор глицина (производство МНПК «Биотики», РФ) в дозе 100 мг/кг массы тела. Животные ежедневно получали глицин в указанной дозе. Активность МВ- креатинфосфокиназы (МВ-КФК), аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в плазме крови определяли через 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 и 168 часов после коронароокклюзии. Результаты показали, что глицин в дозе 100 мг/кг массы тела приводил к меньшему повышению активности МВ-КФК, ЛДГ и АсАТ в плазме крови кроликов в ходе экспериментального инфаркта миокарда. Также было выявлено, что при остром инфаркте миокарда содержание глицина в крови снижается на 39,7 % по сравнению с нормальными значениями. На основании результатов был сделан вывод о кардиопротективном свойстве глицина при некротическом поражении миокарда. Ключевые слова: глицин, кардиоспецифические ферменты, экспериментальный инфаркт миокарда, плазма крови, аминокислоты. Известно, что глицин оказывает седативное (успокаивающее), мягкое транквилизирующее (противотревожное) и слабое антидепрессивное действие, уменьшает чувство тревоги, страха, психоэмоционального напряжения [1]. Глицин также обладает глицин- и ГАМК-ергическим, α1-адреноблокирующим, антиоксидантным [2] и антитоксическим действием. Исходя из этого, можно предполагать, что данный препарат может оказать положительное влияние на течение инфаркта миокарда, так как данное заболевание непременно сопровождается стрессом и страхом смерти. Цель исследования Оценка влияния глицина на активность кардиоспецифических ферментов (МВ-креатинфосфокиназа – МВ-КФК, лактатдегидрогеназа – ЛДГ, аспартатаминотрансфераза – АсАТ) в плазме крови в динамике экспериментального инфаркта миокарда (ЭИМ), а также содержания свободных аминокислот в крови у больных с острым инфарктом миокарда. 135 Республиканская научно-практическая конференция с международным участием «Современные аспекты развития фундаментальных наук и вопросы их преподавания» Материал и методы исследования В опытах было использовано 10 кроликов-самцов породы «шиншилла» массой 2,5-2,8 кг. Все болезненные процедуры и выведение животных из эксперимента осуществляли на наркотизированных животных согласно руководству «Guide for the Care and Use of Laboratory Animals: Eighth Edition National Research Council» [3]. ЭИМ у кроликов, находящихся под нембуталовым наркозом (40 мг/кг массы тела), вызывали путем перевязки нисходящей ветви левой коронарной артерии. После пе- ревязки погиб 1 кролик, через час после перевязки еще 1 кролик. Смертность составила 20%. Сразу после перевязки 5 кроликам через зонд перорально в желудок вводили водный раствор глицина (производство Медицинского научно-производственного комплекса «Биотики», Российская Федерация) в дозе 100 мг/кг массы тела. Далее животные каждые сутки перорально получали глицин в указанной дозе. 3 животных, не получавшие глицин, составили контрольную группу. Кровь из ушной вены животных получали до перевязки (исходная) и через 30 мин, 1, 3, 6, 12 час и на 1, 3 и 7 сутки течения ЭИМ в пробирки с гепарином. Кровь центрифугировали при 3000 об/мин 15 мин. Активность кардиоспецифических ферментов – МВ-КФК, ЛДГ и АсАТ в плазме крови определяли на автоанализаторе “DAYTONA” фирмы Randox (Великобритания). Для выделения свободных аминокислот из плазмы крови больных к 1 мл исследуемому образцу добавляли по 1 мл 20 % ТХУК. Через 10 мин осадок отделяли центрифугированием при 8000 об/мин в течение 15 мин. Отделив 0,1 мл надосадочной жидкости, лиофильно высушивали. Гидролизат упаривали, сухой остаток растворяли в смеси триэтиламин- ацетонитрил-вода (1:7:1) и высушивали. Эту операцию повторяли дважды для нейтрализации кислоты. Реакцией с фенилтиоизоцианатом получали фенилтиокарбамил-производные (ФТК) аминокислот по методу Steven A., Cohen Daviel. Идентификацию производных аминокислот проводили методом ВЭЖХ. Условия ВЭЖХ: хроматограф Agilent Technologies 1200 с DAD детектором, колонке 75x4.6 mm Discovery HS C18. Раствор А: 0,14М CН3СOONa + 0,05% ТЭА рН 6,4, В:CH3CN. Скорость потока 1,2 мл/мин, поглощение 269 нм. Градиент %B/мин: 1-6%/0-2.5 мин; 6-30%/2.51-40 мин; 30-60%/40,1-45 мин; 60-60%/45,1-50 мин; 60-0%/50,1-55 мин. Цифровые данные были обработаны статистически с использованием критерия t Стьюдента. Результаты исследования Полученные результаты показали, что при ЭИМ статистически значимое повышение активности МВ-КФК на 386% наблюдается начиная с 3-ьего часа после перевязки (рис.1). На 6 и 12 часах после окклюзии было замечено значительное повышение активности МВ-креатинфосфокиназы (МВ-КФК) – на 758% и 981% соответственно по сравнению с исходным 136 Республикан