Разработка инновационных методов получения аллергенов и испытания их активности и специфичности в лабораторных условиях

Аннотация

В статье представлена разработка инновационных методов получения бруцеллезных аллергенов и испытания их активности и специфичности в лабораторных условиях НИИВетеринарии. Ключевые слова. Аллерген, бруцеллёз, активность, специфичность, метод, диагностика, контаминация, препараты. Введение. Аллергия – это измененная реактивность организма вследствие предшествующей чувствительности. Впервые термин аллергия (от греческого «аллос» — другой, «эргогон» — движение) был предложен Пирке в 1906 г. на основании изучения патологической реакции человека на повторное введение чужеродной сыворотки (сывороточная болезнь) [1; 2; 3.]. Аллергодиагностика занимает основное и важное место в комплексе санитарно-гигиенических мероприятий, проводимых при бруцеллезе, поэтому она рекомендована Международным Эпизоотическим Бюром (МЭБ) как надежный тест для оценки здоровья стада. Цель и задачи. Разработка инновационных методов получения аллергенов и испытания их активности и специфичности в бруцеллѐзной лаборатории НИИВ. Методика. Согласно методикам Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты [5]. Publishing centre of Finland 2146 International Journal of Education, Social Science & Humanities. Finland Academic Research Science Publishers ISSN: 2945-4492 (online) | (SJIF) = 7.502 Impact factor Volume-11| Issue-4| 2023 Published: |22-04-2023| Результаты. Аллергены готовили путем инкубации культур №1 (условно обозначенный), №2 и №3, и №9 в МППГГБ при +37°С в течение 10-15 дней. Каждые 48 часов рост культур в МППГГБ исследовали под микроскопом по методу Козловского и постоянно контролировали контаминацию. рН и плотность микробных клеток проверяли по оптическому стандарту мутности Л.А.Тарасевича. При снижении рН в ходе испытания подщелачивали 4% стерильным раствором едкого натрия до достижения рН 7,2-7,4. По окончании периода культивирования проверяли чистоту бульонной среды и разделяли среды, в которых выращивался каждая культура, на две части. Первую часть нагревали при температуре +95°С +100°С в течение 30 минут. После охлаждения пищевой среды ее центрифугировали на суперцентрифуге при 10-15 тыс. об/мин в течение 10 минут. После этого полученный концентрат аллергена пропускали через стерильные ватно- марлевые фильтры (способ 1). Вторую часть культуральной жидкости замораживали в полистироловом контейнере при температуре -20°С, помещали на горячую водяную баню (+90°С и выше) и сразу после снятия с водяной бани оттаивали. Эта ситуация повторилась трижды. После последнего растворения имеющуюся бактериальную массу центрифугировали на суперцентрифуге при 10-15 тыс. об/мин в течение 10 минут и пропускали через стерильные ватно-марлевые фильтры (метод 2). Агглютиногенность, токсичность, реактогенность, специфичность и свойства активности экспериментальных рядов аллергенов, полученных из каждой культуры, исследовали на 15 белых мышах и морских свинках и 15 овцах в лабораторных условиях. Масса суспензий белым мышам (18-20 гр.) вводили дозу 0,25 мл под кожу плечевой области с соблюдением правил асептики и антисептики. Морским свинкам (с весом 370-450 гр.) вводили дозу 1 мл под кожу в области внутренней части стороны бедра. В качестве контроля использовали 3 мышей и морских свинок, которым не вводили бруцелл. Экспериментальные серии аллергенов, приготовленные из каждой культуры, были испытаны на 3 овцах. Инъекции разделены на группы по 0,5 мл под кожу левого нижнего века. Аллергены вводили методом пальпебральной пробы, с соблюдением правил асептики и антисептики. Всего аллергены вводили 12 овцам 4 типов культур. В качестве контроля использовали 3 головы неинъекцинированных аллергеном овец. Publishing centre of Finland 2147 International Journal of Education, Social Science & Humanities. Finland Academic Research Science Publishers ISSN: 2945-4492 (online) | (SJIF) = 7.502 Impact factor Volume-11| Issue-4| 2023 Published: |22-04-2023| Перед введением аллергена у морских свинок и 15 овец у них брали кровь и тестировали на РБП и РА. За животными в опыте наблюдали в течение 3-7 дней, ежедневно проводили термометрию. Через 15-20 дней у этих овец брали кровь и тестировали их сыворотку на РБП и РА, и были получены отрицательные результаты. В последующих исследованиях этих овец также повторно использовали для проверки активности аллергодиагностикумов после вакцинации различными бруцеллезными вакцинами. Таким образом, проведенные исследования показали, что экспериментальные аллергены, приготовленные из местных культур №1, №2, №3, №9 не оказывали токсического действия, были безвредны, не обладали антигенной (агглютиногенной) активностью и эти показатели, по которым они соответствовали требованиям, предъявляемым к аллергенам бруцеллеза. При испытании экспериментальных серий аллергенов, приготовленных из каждой культуры, на овцах, вакцинированных различными вакцинами против бруцеллеза, были получены следующие результаты (см. табл.). За овцами в опыте наблюдали в течение 3-5 дней после введения диагностического средства, их кормили и давали воду в обычном порядке, при