Получение антигена против пастереллеза животных

Аннотация

В статье приведены результаты исследований по получению антигена из культуры Pasteurellamultocida, полученный антиген показал свою способность выработки специфических антител против пастерелл при высоком титре и может быть использован, как средство при пассивной иммунизации и лечении животных. Ключевые слова: инфекция, пастереллез, культура, антиген, антитело, титр, лечение. Summary. The article presents the results of studies on obtaining an antigen from a culture of Pasteurella multocida, the obtained antigen showed its ability to produce specific antibodies against Pastereulla at high titer, and can be used as a means for passive immunization and trearment of animals. 342 Key words: infection,pasteurellosis, culture, antigen, antibody, titer, treatment. Введение. Пастереллёз это контагиозная инфекционная болезнь сельскохозяйственных животных, характеризующаяся признаками септицемии, отеками, плевропневмоний, а также геморрагическим воспалительным процессом слизистой оболочки дыхательных путей и кишечника. Исторически термин «пастереллёз» использовался для обозначения заболеваний, вызываемых бактериями рода Pasteurella. Пастереллы могут существовать в верхних дыхательных путях, действовать как первичный или вторичный патоген у разных животных. Для пассивной иммунизации против пастереллёза выпускают гипериммунную сыворотку, обладающую профилактическим и лечебным действием. Нами был проведенпредметный поиск научно-технической и патентной информации, где выявлены наиболее близкие аналоги. Известна культура Pasteurellamultocida для изготовления поливалентной эмульгированной вакцины нового поколения против пастерелеза животных. Культивирование P. multocida проводили на плотных питательных средах: сывороточный бульон Хоттингера, сывороточный и кровяной агары Хоттингера, производственная среда на основе перевара Хоттингера с pH 7,9 -8,0, содержанием аминного азота не менее 175-180 мг%, в пробирках, флаконах. Для осаждения используются флокулянты: анионный – гель гидроокиси алюминия и катионный – хитозан, с различным молекулярным весом (от 2 до 500 кДа ) и степенью диацетилирования (СДА) в пределах 79-97%. Иммуногенность вакцины в дозе 3 млрд / см3 достаточна высока: А-42%, В -86%, Д-50% [1,2]. Недостатки: средняя иммуногенность опытной вакцины составляет 60%. Имеется риск, что в условиях Узбекистана она может не полностью выработать иммунитет против местных культур пастереллу животных. Известна ассоциированная вакцина, которая содержит суспензию инактивированных формалином культур пастерелл и диплококков,выделенных из местного эпизоотического очага в концентрации микробных клеток 8-9 млрд./мл и культивированных в полужидком агаре и мясо-пептонном бульоне со смесью двух адъювантов - геля гидроокиси алюминия и гипсофилина и иммуностимулирующими препаратами [3]. Недостатком является: не указана степень антигенностии иммуногенности культур. Целью является создание эффективного способа приготовления антигена против пастереллёза мелкого скота. Материалы и методы исследований. Рекультивирование культуры Pasteurellamultocida из криоконсервированной (-800С)проводили согласно «Рекомендации по хранению возбудителей инфекционных болезней методом криоконсервации» (Самарканд, 2015). Бактериологические исследования были проведены общепринятыми методами с соответствующими мерами био безопасности. Результаты исследований. Культуру Pasteurellamultocida получали путём селекции и клонирования в НИИВ ГКВиРЖРУз в 2013 г. из музейной культуры.Для оттаивания извлекли флакон из морозильника и поместили в водяную баню при температуре +350С, держали не более 2 минут. Оттаявшую суспензию инокулировали на питательную среду в двух пробирках с триптон-соевым бульоном. Инкубировали в термостате при температуре +370С в течение 24 часов (I-генерация). После этого для восстановления биологических свойств культуры пересевали штрихом на триптон-соевый агар с 10%-ной стерильной кровью барана и инкубировали в термостате при температуре +370С в течение 24 часов (II- генерация). Выросшие отдельные колонии пастерелл «S»-формы микробиологической петлей переносили в пробирки с триптон-соевым бульоном и инкубировали в термостате при температуре +370С в течение 24 часов(III-генерация). Для определения чистоты 343 культуры и морфологических свойств пастерелл из выросших культур готовили мазок на предметном стекле, окрашивали по Граму и микроскопировали. Чистые культуры Pasteurellamultocida с характерными культуральными и морфологическими свойствами (грамотрицательные, окрашиваются биполярно по методу Грамма) использовали для приготовления антигена. Краткая схема способа приготовления антигена из Pasteurellamultocida антигена против пастереллёза мелкого скота: культивирование производственной культуры на питательной среде (МПБ, МПА); производственный контроль в процессе культивирования (чистота, диссоциация, стабильность);осаждение и концентрация выращенной культуры; определения концентрацию пастерелл в 1 мл; инактивация пастерелл; приготовление среды высушив