Генотоксический стресс вызывает формирование эндотелиальными клетками провоспалительного фенотипа: исследование in vitro

Аннотация

Генотоксический стресс может быть одним из триггеров эндотелиальной дисфункции и атеросклероза, однако молекулярно-генетические механизмы этого процесса изучены недостаточно. Воспаление также играет важную роль в атерогенезе. Целью данной работы была оценка уровня маркеров воспаления в первичных эндотелиальных клетках различных артерий человека, культивируемых в условиях мутагенной нагрузки. Первичные эндотелиальные клетки коронарной (HCAEC) и внутренней грудной артерий человека (HITAEC) культивировали в присутствии 500 нг/мл алкилирующего мутагена митомицина С (ММС) (экспериментальная группа) или 0,9% NaCl (контрольная группа). Цитокиновый профиль оценивали методом дот-блоттинга после 6 ч экспозиции клеток ММС с последующими сутками культивирования в чистой культуральной среде. Уровень экспрессии интересующих генов определяли с помощью количественной ПЦР. Установлено, что в обеих клеточных линиях ММС увеличивал секрецию белков IL-8, MCP-1, IP-10 и PDGFB и не влиял на продукцию MIP-1β относительно контроля. Синтез TIMP-2 в экспонированных клетках HCAEC происходил активнее, чем в клетках HITAEC. Белок sTNF RI был выявлен только в клетках HCAEC. Результаты оценки экспрессии генов показали, что клетки HCAEC, экспонированные MMC, характеризуются повышенной экспрессией генов IL-8, MCP-1 и IP-10, сниженной экспрессией гена TIMP-2 и отсутствием изменений уровня мРНК генов MIP-1β и PDGFB в сравнении с контролем. В экспериментальных клетках HITAEC был отмечен повышенный уровень мРНК IL-8 и IP-10, пониженная экспрессия TIMP-2, а экспрессия генов MCP-1, MIP-1β и PDGFB не изменялась. Не была обнаружена экспрессия гена TNF-RI. Таким образом, генотоксический стресс в эндотелиальных клетках, индуцированный ММС, приводит к дифференциальному неспецифическому воспалительному ответу, который, в свою очередь, является триггером эндотелиальной дисфункции.